第一節(jié) 卵黃抗體的概念

從免疫禽蛋中提取出的針對(duì)特定抗原的抗體，是一種具有較強(qiáng)免疫功能的蛋白質(zhì)，多為IgG。禽類(lèi)免疫后在其卵黃中產(chǎn)生的大量高純度IgG，其對(duì)某些禽類(lèi)疫病具有明顯治療和緊急預(yù)防作用。卵黃抗體是用特定抗原多次免疫產(chǎn)蛋母雞，使機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的特異性抗體，并轉(zhuǎn)移、貯存在卵黃中，經(jīng)提取純化的免疫球蛋白卵黃抗體（Eggyolk antibodies eyAb），也稱(chēng)卵黃免疫球蛋白(Eggyolkimmunogbhin，IgY) 。（可行性 研究 ）

第二節(jié) 卵黃抗體的分離提純方法

卵黃中的主要成分是蛋白質(zhì)和脂肪，其比例為1：2。大部分蛋白質(zhì)都是脂蛋白，存在于卵黃顆粒中，不溶于水，只有卵黃球蛋白(α、β、γ)是水溶性的，而IgY是γ卵黃球蛋白。因此IgY的分離純化首先需要有效地去除卵黃中的脂類(lèi)，從水溶性蛋白中分離IgY。

多年來(lái)，已建立了許多較為高效而經(jīng)濟(jì)的方法，這些方法大多以PEG、硫酸葡聚糖、天然膠，如藻酸鈉、角叉聚糖或乙醇沉淀等方法初步純化蛋白質(zhì)。

1980年，Polson首先提出聚乙二醇(PEG)兩步沉淀法，分別用終濃度為3.5%和12%的PEG分步沉淀，用硫酸銨鹽析法去除PEG。1985年，在此基礎(chǔ)上提出了冷乙醇沉淀的改進(jìn)方法，使產(chǎn)量提高，而且能有效地去除殘留PEG。1981年Jensensius等提出了硫酸葡聚糖沉淀法(DS法)，PEG法和DS法的產(chǎn)量相當(dāng)，但提取的IgY制品含有一定量的雜蛋白。Bade和Stegemann(1984)用預(yù)冷的丙烷和丙酮(-20℃)沉淀蛋白質(zhì)并去除脂質(zhì)，經(jīng)DEAE柱層析進(jìn)一步純化，其IgY抗體活性與用Polson法提純的IgY之間無(wú)明顯差別，且穩(wěn)定性好，經(jīng)3次以上凍融，抗體活性未見(jiàn)改變。1992年Akita等用水稀釋法(WD)提純IgY，每個(gè)卵黃可獲得100mg以上的IgY。此后，Akita等比較了WD法、PEG法、DS法和黃原膠法(Xanthan法)的提純效果，結(jié)果表明：WD法產(chǎn)量最高，其次為DS法，WD法更適合大規(guī)模生產(chǎn)。

1993年，Horikoshi提出了冷乙醇分級(jí)離心的方法，分別用60%、30%、25%的冷乙醇沉淀離心，得到純度達(dá)99%以上的IgY。此法適用于大規(guī)模制備IgY。

工業(yè)上大規(guī)模生產(chǎn)IgY的方法有：超臨界二氧化碳?xì)怏w抽提法、卡拉膠法、硫酸銨鹽析法。

第三節(jié) 卵黃抗體的優(yōu)點(diǎn)和存在的問(wèn)題

母雞易于飼養(yǎng)，費(fèi)用不高，為制備大劑量抗體提供了經(jīng)濟(jì)可行的豐富資源；無(wú)需采血．只需收集免疫母雞產(chǎn)下的蛋即可獲得抗體．對(duì)雞體無(wú)損傷，且符合現(xiàn)代動(dòng)物保護(hù)規(guī)則：使用少量的抗原免疫禽類(lèi)既可獲得大量的質(zhì)量均一的特異性卵黃抗體：由于種系發(fā)育距離相差很大，禽類(lèi)卵黃抗體與哺乳動(dòng)物免疫球蛋白之間不會(huì)發(fā)生交叉血清學(xué)反應(yīng)；不激活哺乳動(dòng)物的補(bǔ)體系統(tǒng)。不與蛋白A、G和Fc受體相結(jié)合，避免在免疫檢測(cè)過(guò)程中產(chǎn)生假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果；卵黃抗體特異性聚集在卵黃．無(wú)IgA，IgM干擾；耐熱、耐酸，巴氏滅菌溫度下也不會(huì)失活：具有安全、高效且無(wú)公害的特點(diǎn)，是理想的獸醫(yī)l臨床藥物：卵黃抗體制備方法簡(jiǎn)單。成本低，使用方便且不受時(shí)間、地域和季節(jié)的限制。

卵黃是良好的微生物培養(yǎng)基，卵黃內(nèi)含有支原體、沙門(mén)氏菌、腺病毒及呼腸孤病毒等可以垂直傳播給雛雞的病原。對(duì)制品中可能帶有的病原微生物的滅活技術(shù)不過(guò)關(guān)，可造成一些疾病的傳播。在卵黃抗體的萃提精制過(guò)程中，既要保證抗體生化結(jié)構(gòu)的完整和生物活性，又要徹底去除垂直傳播病原，特別是如何保持口服抗體的活性成為亟待解決的一個(gè)問(wèn)題。生產(chǎn)卵黃抗體沒(méi)有統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，沒(méi)有規(guī)范的操作規(guī)程，沒(méi)有用于監(jiān)測(cè)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。用于制備禽用抗體所選用的商品用家禽自身的抗體水平不， 影響到卵黃抗體的效價(jià)水平。使用該類(lèi)禽蛋制備的卵黃抗體時(shí)，常對(duì)正常的免疫發(fā)生干擾作用。另外由于卵黃抗體十分黏稠，所以注射困難、吸收慢，在注射部位易形成干酪樣物質(zhì)、腫大或壞死等，影響抗體的作用及商品外觀。目前國(guó)內(nèi)制品大多為液態(tài)，與微生態(tài)制劑混合后會(huì)產(chǎn)生腐敗現(xiàn)象，其生產(chǎn)工藝是通過(guò)冷凍干燥技術(shù)提取抗體，大大增加了生產(chǎn)成本。因此該類(lèi)產(chǎn)品質(zhì)量有待于進(jìn)一步提高，產(chǎn)品性狀有待改善。如能應(yīng)用高免蛋純化卵黃抗體，將它制成精制抗體或干粉抗體，同時(shí)尋找降低成本的制備方法，則可發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)，具有很廣闊的應(yīng)用前景。

第四節(jié) 卵黃抗體的開(kāi)發(fā)前景

IgY作為替代抗生素的新型飼料添加劑正在引起人們的關(guān)注，IgY取代抗生素用作生長(zhǎng)促進(jìn)劑，不會(huì)產(chǎn)生藥物殘留，是一種安全的綠色添加劑。

生產(chǎn)技術(shù)較為成熟：用雞卵黃大量生產(chǎn)、制備多克隆抗體是近年來(lái)抗體制備技術(shù)中新興的 研究 領(lǐng)域。
IgY產(chǎn)量高，價(jià)格低廉。

使用IgY技術(shù)生產(chǎn)免疫球蛋白，可以減少對(duì)動(dòng)物的應(yīng)激，提高動(dòng)物的福利。

年齡較大的動(dòng)物會(huì)導(dǎo)致IgY分解失活，然而通過(guò)包埋處理可避免這一問(wèn)題。Shimizu等(1993)用脂質(zhì)體包埋IgY，在pH2.8的胃蛋白酶中37℃溫育1h，包埋的IgY仍可保存80%的活性。

綜上所述，雞卵黃免疫球蛋白是一種高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的多克隆抗體，而且雞大規(guī)模工業(yè)化飼養(yǎng)成本低，經(jīng)濟(jì)方便，同時(shí)制備IgY的工藝相對(duì)簡(jiǎn)單。應(yīng)用卵黃抗體防治疾病也有不可避免的缺點(diǎn)，如可能帶有蛋傳染性疾病的病原，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)存在潛在的威脅。

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